被筑巢的PCR
被筑巢的PCR
被筑巢的PCR 的定义:
被筑巢的PCR 是聚合酶链式反应的变异(PCR), 二对(代替一对) PCR 底漆被使用放大片段。
第一对PCR 底漆放大片段相似与标准PCR 。但是, 第二对底漆称被筑巢的底漆(如同他们/被筑巢在第一片段之间) 困境里面第一PCR 产品片段允许短的第二个PCR 产品的放大作用比第一个。
被筑巢的PCR 好处是如果错误PCR 片段被放大了, 区域由第二套底漆会放大第二次的可能性是相当降低。因而, 被筑巢的PCR 是非常具体PCR 放大作用。
被筑巢的PCR 反应
被筑巢的PCR 要求被使用放大一个具体DNA 片段使用PCR 二不同奔跑的二套底漆。第二对底漆起作用放大一个更小的具体DNA 片段位于在第一PCR 产品之内。
被筑巢的PCR 反应图
被筑巢的PCR 的步
步骤一个: DNA 目标模板由第一套底漆一定被显示在 蓝色。底漆也许束缚对选择, 相似的给多个产品然而只这些PCR 产品的当中一个给意欲的序列的底漆束缚位置(多个产品没被显示) 。
步骤二: PCR 产品从第一PCR 反应被服从对第二PCR 跑然而以第二新套底漆被显示在 红色。
当这些底漆被筑巢在第一PCR 产品之内, 他们使它非常不太可能, non-specifically 被放大的PCR 产品会包含束缚位置为两套底漆。这被筑巢的PCR 放大作用保证, PCR 产品从第二PCR 放大作用有一点点或没有污秽从non-specifically 被放大的PCR 产品从供选择的底漆目标序列。
被筑巢的PCR 协议
参见 被筑巢的PCR 协议
被筑巢的PCR: 出版物
被筑巢的补丁PCR 使能高度多元化的变化发现在g... 关系 文章的候选人
被筑巢的补丁PCR 使能高度多元化的变化发现在候选人基因。
染色体皇家经济学会。10 10月2008 日;
作者: Varley 柯, Mitra RD
医疗resequencing 候选人基因在各自的耐心样品变得越来越重要在诊所和在临床研究。医疗resequencing 要求放大作用和程序化许多候选人基因在许多耐心样品。这里我们介绍被筑巢的补丁PCR, 一个新颖的方法为是非常具体的, 可能敏感地查出SNPs 和变化高度的多元化的PCR, 并且容易实施。这是结合复合PCR 以样品具体DNA barcodes 和下一代程序化使能高度复合变化发现在候选人基因为多个样品平行的第一方法。在我们的中间试验中, 我们放大了exons 从结肠癌和匹配了正常人的genomic DNA 。从各个样品, 我们成功地放大了96% (90 94) 被瞄准的exons 从横跨染色体, 共计21.6 序列kbp 。所有程序化的百分之九十读是从被瞄准的exons, 显示出, 被筑巢的补丁PCR 是高度具体的。我们发现丰盈读每exon 是可再生的横跨样品。我们可靠地查出了germline SNPs 和发现了一个冒号肿瘤具体胡话变化在APC, 基因原因地被牵连在colorectal 癌症。与被筑巢的补丁PCR, 候选人基因变化发现横跨多个各自的耐心样品可能现在运用第二代程序化的力量。
PMID: 18849522 [ PubMed - 依照按出版者供应]