Nested PCR Protocol巢式PCR议定书
Nested PCR Protocol Conditions巢式PCR条件议定书
For 50 ul reactions, the amounts given are per reaction. 50 UL认证的反应，给出的数额是每反应。 Make sure you make an extra reaction for every 6 reactions to have enough master mix.请务必作出额外的反应每6反应有足够的主结构。
External Round of PCR对外轮的PCR
Master Mix硕士混合
dNTP mix (2mM each dNTP)核苷酸组合（ 2mm的每个核苷酸） | 5 µl第5 μl |
10x PCR buffer (15mM MgCl2) 10倍反应缓冲液（ 15毫米氯化镁） | 5 µl第5 μl |
Taq polymerase (0.2U) Taq聚合酶（ 0.2U ） | 0.2 µl 0.2 μl |
dH2O | 25.8 µl 25.8 μl |
Primer mix.引物组合。 Forward and Reverse primers.正向和反向引物。 (5 pmoles/µl each) （ 5 pmoles / μl每个） | 4 µl第4 μl |
Total Mastermix Volume: 共计Mastermix数量： | 40 µl 40 μl |
DNA Template DNA模板 | 10 µl 10 μl |
Internal Round of PCR内部轮聚合酶链反应
Nested PCR Master Mix巢式PCR硕士组合
dNTP mix (2mM each dNTP)核苷酸组合（ 2mm的每个核苷酸） | 5 µl第5 μl |
10x PCR buffer (15mM MgCl2) 10倍反应缓冲液（ 15毫米氯化镁） | 5 µl第5 μl |
Taq polymerase (0.2U) Taq聚合酶（ 0.2U ） | 0.2 µl 0.2 μl |
dH2O | 35.8 µl 35.8 μl |
Primer mix.引物组合。 Forward and Reverse primers.正向和反向引物。 (5 pmoles/µl each) （ 5 pmoles / μl每个） | 4 µl第4 μl |
Total Mastermix Volume: 共计Mastermix数量： | 49 µl 49 μl |
DNA Template (Sample from external round PCR product) DNA模板（样本来自外部轮PCR产物） | 1 µl 1 μl |
PCR Machine Cycling Parameters 聚合酶链反应循环机参数 | |
1 cycle: 1个循环： | 94ºC/30 sec. 94 º C/30秒。 |
35 cycles: 35周期： | 94ºC/30 sec. 94 º C/30秒。 |
Hold:持有： | 4ºC 4 º ç |