PCR 清洁
PCR 清洁背景
通常, 您最初地更优选您的PCR, 将是您的对严密岗位PCR 清洁方法的需要。
如果您的PCR 情况很好被优选, 大多数您的增加的底漆和dNTP 的意志被使用在pcr 放大作用期间, 因而有将是唯一非常少量干涉的因素并且它也许是可能执行直接程序化。如果您去次级克隆您的PCR 片段入TOPO 克隆传染媒介, 那么您需要有只一条主要PCR 带可看见在您的胶凝体。如果您有多条带, 确定您首先优选您的PCR 情况。
PCR 产品不需要被净化在程序化然而获得前准确程序化的数据, 它通常被推荐清扫您的PCR 产品在放大作用以后。
如果您增加了过份底漆数额或底漆是未使用的, 这些底漆可能作为引伸底漆在程序化期间, 造成的另外的套的世代可能使程序化数据解释困难如果不不可能洗染被标记的程序化的片段。
岗位清洁PCR prducts 应该跑在agarose 胶凝体审查洗净的质量。如果抹上或多条带是存在, 产品污迹, 您通常不会将obatin 高质量序列数据。
片段的胶凝体洗净可能是成功的使用一低熔化温度agarose 。您能去除您的带在紫外光之下与剃刀, 和从切片提取DNA 运用electroelution 或胶凝体提取方法使用缓冲/专栏。
PCR 清洁为程序化和克隆
取消剩余dNTPs, unincorporated 底漆, 和未指明的PCR 产品您能使用几个方法。
Qiagen PCR 洗净成套工具和其它PCR 清洁成套工具。
您能并且去除底漆并且dNTPs 由用尽PCR 产品在agarose 形成胶冻, 切开带和举办DNA 提取从agarose 胶凝体使用Qiagen 胶凝体洗净成套工具。
在PCR 清洁以后
在任一个PCR 清洁方法以后, 您应该建立PCR 产品的质量和数量。您能做这由跑样品使用agarose 胶凝体electrophoreiss 与DNA 含量标志一起。
您能并且估计DNA 的数量使用一个紫外分光光度表。