PCR克隆
克隆PCR产品
如果您想要克隆脱氧核糖核酸的片段到质粒或构建，其中一个容易的方法执行此使用PCR。 如果您有脱氧核糖核酸片段或基因已经在质粒，并且侧片段的限制站点是与您想要克隆它到的新的质粒兼容，限制酵素消化很好通常运作。
然而，如果您想要设计片段的新的限制站点，修建删除片段或者改变在脱氧核糖核酸之内的站点，使用PCR， PCR或脱氧核糖核酸片段的聚合酶链反应是其中一个最容易和最佳的方式克隆您的片段。
设计PCR克隆的初级读本
PCR克隆的初级读本通常是长由于需要添加限制站点。
限制站点通常是6长度bp。 如果您没去subclone PCR产品，您需要添加核苷酸5 '限制站点
这允许限制酵素束缚对和剪切限制站点是更加高效的。
间隔号限制站点初级读本顺序(设计由初级读本程序)
3 bp --6bp 15-22 bp
PCR Subcloning
(Subclone意味克隆PCR产品到向量，在您插入它到您的向量利益之前。 此的好处包括情况您再从未必须PCR您的插入，您永远将有它在冰箱，并且您能长大，和您希望使用细菌。)一样多
从我们的经验，剪切PCR产品比剪切片段通常较不高效的在向量外面。 因此，剪切PCR产品和克隆他们到高效和您可以把麻烦执行此的您的向量可能不直接地。
那是subcloning到一个subcloning的向量的方式通常是最佳。
TOPO向量
TOPO向量为subcloning是极大的，虽然他们可以是消耗大的。 他们从长远看将救您时间，并且使克隆PCR产品更加容易和更加高效。
此的原因是您能容易地消化在质粒的脱氧核糖核酸。 因为它可能容易地束缚对和消化您的部分，它为限制酵素是高效。
缺点是您必须有高效和优化PCR情况。 许多范围出现在您的PCR的将使它困难，如果不不可能克隆您的PCR产品利益。
在大约2天内，您通常能subclone您的PCR产品。 结扎术只需要5分钟，并且您能镀您的细菌殖民地结扎术的日。 一旦您采摘殖民地次日并且生长他们在媒体，您不仅放大您的插入，您现在也有您能冻结与丙三醇到液氮多年来您的subcloned插入的细菌殖民地。
当您需要做与您的插入时的另一构建这确实帮助!