PCR 底漆
PCR 底漆的定义:
PCR 底漆突然唯一搁浅, 综合性地被综合的低聚核苷酸通常突然比50 核苷酸(经常18-25 核苷酸) 。
PCR 底漆的应用
PCR 底漆重要虽然他们补全对你需要放大DNA 片段的起点和结束利益。底漆选择因此区域的界限由PCR 放大。在PCR 焖火周期期间, PCR 底漆锻炼对DNA 的补全区域。DNA 聚合酶捆绑和3’ OH oligo 允许DNA 综合发生。
选择PCR 底漆
重要因素考虑当选择底漆:
- 优选的Tm (焖火T) ~ 50-60.C
- 低聚核苷酸GC 内容应该是在40-60% 之间。
- 故意的Tm (熔化的温度) 为两底漆被使用在反应不应该不同> 5.C 。
- 更加雷管的焖火温度通常是5.C 在故意的更低的Tm 之下。但是它应该经验主义地被选择为各自的情况。
- 内在自已补全簪子> 4 和二聚体> 8 应该被避免。
- 3' terminus 极端是案件敏感- 它不能是补全对任何另一底漆的区域被使用在反应, 必须提供正确基地匹配对模板。
- 如果可能, 底漆应该起动和末端与1-2 G 或C 残滓
- 底漆不应该有任何extendisve 次要结构或自已互补性(能导致底漆二聚体) 。
PCR 底漆设计
节目协助您在PCR 底漆设计:
Primer3
WebPrimer
发现他们这里- PCR 底漆设计工具。