PCR排错

PCR问题和解决方法， PCR帮助

什么是您的PCR问题？：

问题：

当运行琼脂糖胶凝体您察觉不是合适的估量的更大的未指明的PCR范围。

对长的未指明的产品的解决方法在PCR ：

减少退火时间

减少扩展名时间

减少扩展名温度对62-68º C

增加氯化钾(缓冲)含量对1.2x-2x，但是保留氯化镁含量在1.5-2mM

增加氯化镁含量3-4.5 mM，但是保留dNTP浓度常数。

使用较少初级读本

采取较少脱氧核糖核酸模板

采取较少Taq聚合酶

如果不在上述工作：检查初级读本重复性顺序(疾风与数据库对齐顺序)并且更换初级读本

一些的组合或所有在上面。

问题：

当运行琼脂糖胶凝体，您察觉一些非常小的PCR范围。这些是您的初级读本的范围或大约两个您的初级读本的范围(A和一起B)。这些被命名“初级读本二聚体”和由您的初级读本焖火形成与本身或与另一个初级读本。

对初级读本二聚体的解决方法在PCR ：

使用较少初级读本。

再设计初级读本和定购新的批。确定您使用初级读本对于自焖火的设计软件和检查，并且初级读本不共享补充顺序的大百分比。仔细检查初级读本拉人二聚体和hetero二聚体形成与OligoAnalyzer

执行PCR有和没有甲酰胺。

滴定Mg2+ (MgCl - 1.5， 2.0， 2.5和3.0 mM)浓度。

增加脱氧核糖核酸模板金额(浓度)。

增加焖火温度(优选使用梯度PCR设备的尝试查找焖火的最佳的温度)。

设法添加DMSO至5%。

设法使用HotStart PCR而不是正常Taq聚合酶PCR。

一些的组合或所有在上面。