PCR 查明故障
PCR 问题和解答, PCR 帮助
什么是您的PCR 问题?:
长的未指明的产品在PCR
当跑agarose 胶凝体您察觉不是不错估量的更大的未指明的PCR 带。
对长的未指明的产品的解决办法在PCR:
减少焖火时间
减少引伸时间
减少引伸温度到62-68º C
增加KCl (缓冲) 含量对1.2x-2x, 但保留氯化镁含量在1.5-2mM
增加氯化镁含量3-4.5 毫米但保留dNTP 集中常数。
使用较少底漆
采取较少DNA 模板
采取较少Taq 聚合酶
如果无上述工作: 检查底漆反复序列(疾风与数据库排列序列) 并且改变primer(s)
some/all 的组合在上面。
问题:
PCR 底漆二聚体
当跑agarose 胶凝体, 您察觉一些非常小PCR 带。这些是您的底漆的大小或关于两您的底漆的大小(A 和B) 一起。这些被命名"更加雷管的二聚体" 和由您的底漆焖火形成与本身或与另一底漆。
对更加雷管的二聚体的解决办法在PCR:
使用较少底漆。
再设计底漆和定购新批。确定您用途底漆设计软件和检查对于自已焖火和底漆不分享补全序列的大百分比。仔细地检查底漆拉人二聚体和hetero 二聚体形成与OligoAnalyzer
举办PCR 与和没有甲酰胺。
滴定Mg2+ (MgCl - 1.5, 2.0, 2.5 和3.0 毫米) 集中。
增加DNA 模板数额(集中) 。
增加焖火温度(尝试优选使用梯度PCR 机器对发现优选的温度为焖火) 。
设法增加DMSO 由5% 决定。
设法使用HotStart PCR 代替规则Taq 聚合酶PCR 。
some/all 的组合在上面。