殖民地PCR
什麼是殖民地PCR?
殖民地的 定義PCR 是:
殖民地PCR 細菌(E.Coli) 或酵母掩護克隆為正確結紮術或質粒產品。細菌選擇的殖民地或酵母被採摘以一個不育的牙籤或吸移管要訣從成長(agarose) 板材。這被插入入PCR 大師混合或然後前被插入入被真空加熱的水。PCR 然後被舉辦確定如果殖民地包含DNA 片段或質粒利益。
細菌E.Coli 殖民地PCR 協議
殖民地PCR 快的Prep 方法
步驟1:
採摘細菌殖民地以一個被真空加熱的牙籤或吸移管要訣和打旋它入25 μ升TE 被真空加熱的dH2.O 在一支被真空加熱的microfuge 管。不要去除整個殖民地, 和標記您preferrably 採摘數字板材的區域(和microfuge 管的) 底部。
步驟2:
加熱混合在煮沸的熱水鍋或熱的(90-100C) 熱化塊2 分鐘
步驟3:
轉動樣品2 分鐘高速在離心機。
步驟4:
轉移 μ上層清液的20 升入一支新microfuge 管。
步驟5:
採取1-2 μ升上層清液作為模板在一25 μ升PCR 標準PCR 反應。
酵母殖民地PCR 協議
採取增長在板材新鮮從37C 孵養器的酵母細胞(新鮮地增長的酵母是更好)
採取一個被真空加熱的牙籤或吸移管要訣和接觸一點酵母殖民地。不要刮全殖民地。暫停它入一標準PCR mastermix 。
PCR 循環的情況:
第一弈質的步: 95 .C, 5 分鐘
弈質步: 95 .C, 30 秒
燜火步: 50-55 .C, 30 秒
引伸步: 72 .C, 1min/kb
重覆 步s 2-4: 34 次
最後的引伸: 72 .C, 3 分鐘
裝載整個PCR 反應1% agarose 膠凝體。
殖民地PCR - Pubmed 出版研究
原封細菌(殖民地直接PCR PCR) 。 相關文章
原封細菌(殖民地直接PCR PCR) 。
Curr Protoc Microbiol 。2008 年May;Appendix 3:Appendix 3D
作者: Woodman 我
這個協議描述一個高效率的方法為篩選原封細菌為渴望的DNA 序列出現使用polymerase 鏈式反應(PCR) 。這個方法共同地指殖民地PCR 。
PMID: 18770531 [ PubMed - 在過程中]