相反PCR
相反PCR 背景
相反PCR 並且告訴的IPCR, 和由Ochman 等第一次描述了1988 年(1) 。
標準PCR 的局限是, 5' 和3' 您的DNA 片段的側的地區利益必須為人所知。相反PCR 允許您舉辦PCR 當您只有一個內部序列的資訊。
相反polymerase 鏈式反應是PCR 變形, 和被使用當只目標DNA 的一個內部序列為人所知。它是因此非常有用的在辨認genomic 插入物側的DNA 序列。相似與其它PCR 方法, 相反PCR 放大目標DNA 使用DNA polymerase 。
相反PCR 使用標準PCR (polymerase 鏈式反應),
然而它安排底漆被安置在通常取向的反向。模板為反向底漆是被綁紮在本身形成圈子的制約片段。
相反PCR 方法
相反PCR 方法包括一系列的消化和自已結紮術與DNA 由制約endonuclease 被切開。這裁減導致一個已知的序列在或者未知的序列的結尾。
相反PCR 步
1) 目標DNA 輕微被切開成幾kilobases 的更小的片段由制約endonuclease 消化。
2) 自已結紮術導致在低集中之下導致磷酸鹽中堅改革。這給一個圓DNA 結紮術產品。
3) 目標DNA 是然後制約被消化與一知道的endonuclease 。這引起裁減在已知的內部序列之內引起一個線性產品以已知的終端序列。這可能現在被使用為PCR (polymerase 鏈式反應) 。
4) 標準PCR 被舉辦與底漆補全對現在已知的內部序列。
總之:
相反PCR 起作用克隆序列側一個已知的序列。側的DNA 序列被消化和然後被綁紮引起圓DNA 。
PCR 底漆指向從已知的序列然後被使用放大側的序列。
相反PCR 的應用
相反PCR 有許多應用在分子生物學包括序列的放大作用和證明側transposable 元素, 和genomic 插入物的證明。
相反PCR 協議
相反PCR 參考
1 。Ochman H, Gerber 和, Hartl DL 。 遺傳學。 1988 Nov;120(3):621-3 。