實時PCR
實時PCR : 介紹
雖然定量mRNA 傳統方法是相當好的譬如北弄髒和在原處雜交, 他們不接近實時PCR 的舒適和速度。
RT-PCR 或反向transcriptase PCR 就該半定量需要裝載樣品在膠凝體和ethidium 溴化物感覺遲鈍。因而, 實時PCR 被開發了出於需要定量在mRNA 表示上的區別以容易和快的方式, 並且由於需要使用少量mRNA 譬如那些獲得了由小組織樣品, 並且LCM (laser 捕獲microdissection) 隔絕了細胞。
實時反向transcriptase (RT) PCR 是與其它定量PCR 不同如同它定量最初的相當數量模板而不是查出相當數量最後的被放大的產品(Freeman 1999 年; Raeymaekers, 2000) 。
實時PCR 為點 描繪及時在循環期間當PCR 產品的放大作用利益首先被查出 而不是相當數量被積累在終點在PCR 以後包含很大數量的週期的PCR 產品利益。 實時PCR 做這由監測相當數量熒光散發在PCR 反應期間, 並且這作為相當數量的顯示發生在各個PCR 週期期間的PCR 放大作用。 因而, 在更新的實時PCR 機器裡, 你能視覺上看反應的進展在"實時" 。
實時PCR 並且有一個更寬的力學範圍由決定107 摺疊(比較對1000 摺疊在常規RT-PCR) 。分析用試樣的力學範圍確定多少目標集中可能變化仍然仍然被定量。這個寬力學範圍並且導致一個更加準確的測量。