RT-PCR
扭轉副本Polymerase 鏈式反應
反向副本polymerase 鏈式反應(RT-PCR) 根據polymerase 鏈式反應(PCR) 。它更加重要地根據反向副本的過程, 相反抄錄核糖核酸成DNA 和與retroviruses 最初地被隔絕。
RT-PCR 技術允許DNA (補全或拷貝DNA 的) 形成從核糖核酸, 存放核糖核酸序列(譬如信使核糖核酸, mRNA) 以核酸的更加穩定的形式, DNA 。這反向副本從核糖核酸入它的反向補全DNA (DNA) 是RT-PCR 的一個通常二步過程的第一步。此外, 由複製核糖核酸入DNA, 你可能然後放大DNA 序列由使用底漆具體為DNA 序列。這放大作用是RT-PCR 的二步過程的最後的第二主要步。
RT-PCR 的過程
第一步RT-PCR 被稱為"第一子線反應" 。在一子線反應, 補全DNA 並且被命名的DNA, 由信使核糖核酸模板利益被做使用oligo dT (oligonucleotide 多dTs 行動相似與底漆和困境到3 ' polyA 序列位於3' UTR - 未翻譯的區域, 是存在在多數mRNAs), dNTPs, 並且一核糖核酸依賴DNA polymerase, 扭轉transcriptase, 通過反向副本的過程。
這些因素被結合在反向transcriptase 緩衝1 個小時在37.C 。在反向transcriptase 反應是完全的之後, 並且DNA 被綜合了, 消化核糖核酸從核糖核酸DNA 雜種的RNaseH 增加(核糖核酸消化酵素) 。在孵出以後與RNaseH, 標準PCR 或polymerase 鏈式反應被舉辦使用DNA oligo 底漆具體為序列利益。這第二步被稱為"第二子線反應" 。
因而由增加耐高溫的DNA polymerase, 上游和下游DNA 底漆, 唯一擱淺的DNA 成為雙擱淺和由放大放大, 允許罕見或低拷貝mRNA 序列的偵查它的補全DNA 。
RT-PCR 的應用
mRNA 補全序列的指數放大作用或核糖核酸序列通過反向副本polymerase 鏈式反應考慮到一個高敏感性偵查技術, 低拷貝數字或較不豐富的核糖核酸分子可能被查出。它並且使用克隆mRNA 序列以補全DNA 的形式, 允許包含基因所有mRNA 序列用細胞被表達DNA (DNA 圖書館) 的圖書館被創造。此外, 它允許的DNA 修建創作由RT-PCR 克隆和允許基因表示在核糖核酸和蛋白質水平為進一步研究。